TOXICIDADE E EFICIÊNCIA DO DIMETILSULFÓXIDO (DMSO) NO CONGELAMENTO DE CÉLULAS MADIN-DARBY BOVINE KIDNEY (MDBK)

Resumo

O dimetilsulfóxido (DMSO) é um composto mundialmente utilizado como solvente orgânico que nas últimas décadas vem sendo usado na medicina principalmente como anti-inflamatório. Em laboratórios de cultivo celular é utilizado rotineiramente como crioprotetor de células e, sendo assim, objetivou-se estudar a toxicidade e eficiência no congelamento celular, em diferentes concentrações e tempos de exposição. Células da linhagem MDBK (Madin-Darby Bovine Kidney) foram cultivadas em placas de 96 cavidades e, posteriormente, DMSO em concentrações que variaram de 0,5% a 20% foi adicionado em períodos que variaram de 15 minutos a 24 horas de exposição. Após, a viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio do 3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo (MTT). Concomitantemente, células MDBK cultivadas em garrafas foram tripsinizadas e congeladas com diferentes concentrações de DMSO. Após o descongelamento, foi realizada a contagem de células viáveis com azul de tripan. Os resultados obtidos não apresentaram diferença (p>0,05) entre os tratamentos utilizando-se 0,5%, 1% e 2,5% de DMSO, uma vez que a morte celular não ultrapassou 22,84% ± 3,97% com 24 horas de incubação. Porém nos tratamentos com maior concentração, com apenas uma hora de incubação, a taxa de morte celular ultrapassou os 20%, diferindo do controle (p<0,01). Após o descongelamento, o melhor protocolo foi aquele que utilizou 10% de DMSO, não diferindo do controle (p>0,05). As concentrações não tóxicas para células avaliadas pelo ensaio do MTT, não foram capazes de impedir o rompimento celular após congelamento e descongelamento. Conclui-se que é necessário o uso de crioprotetor para o congelamento, porém a adição do DMSO deve ser apenas momentos antes do congelamento devido à sua toxicidade quando incubado com as células.