TESTE DE ADESÃO ESPERMÁTICA HETERÓLOGO IN VITRO MODIFICADO

Resumo

O teste de adesão espermática heterólogo (espécies diferentes doadoras de gameta masculino e feminino) in vitro, apesar de ser sensível para determinação da fertilidade, conta com meios e sistemas de incubação onerosos. Assim, o objetivo deste trabalho foi simplificar o teste de adesão espermática heterólogo in vitro, avaliando a viabilidade de utilização do Meio M2 em banho maria a 39 ^oC frente ao meio KRB em estufa de CO₂ a 5% (método original). Os ovócitos foram obtidos de leitoas pré-púberes, com diâmetro folicular entre 3-6 mm, selecionados e desnudados por sucessivas pipetagens. Os espermatozoides foram obtidos através do corte da cauda epididimária de ratos Wistar adultos. A concentração final no meio de fertilização foi de 1x10⁶ espermatozoides/mL. Em cada tratamento foram utilizados pools de 30 ovócitos para cada macho. O grupo controle foi incubado em meio de Krebs-Ringer bicarbonato (KRB) e em incubadora de CO₂ a 5%, e no grupo tratado (T1) o meio foi M2 (Sigma, M7167) com HEPES e albumina sérica bovina (BSA) e incubado em banho-maria a 39 °C. A co-incubação (espermatozoides/ovócito) foi realizada por 2 h a 37 °C. A adesão foi avaliada por exposição dos ovócitos a uma solução de Hoescht 33342 em PBS e incubados a 37 °C/15 min, seguido de avaliação em microscópio de epi-fluorescência em aumento de 400X. A taxa de adesão de espermatozoides no ovócito, no grupo controle e T1, não diferiram estatisticamente, foram de 23,5±3,9% e 24,7±4,2%, respectivamente. Também não foi observada diferença significativa entre os tratamentos para o número de espermatozoides/ovócito (Controle = 0,9±0,1 e T1 = 0,8±0,1) (p>0,05). Estes resultados demonstraram que o método simplificado (T1) não interfere nos resultados do teste de adesão espermática. Desse modo, o teste de adesão espermática pode ser simplificado com a utilização do banho-maria, sem que ocorram alterações nas taxas de adesão e polispermia.